重复使用凯氏烧瓶会导致硅藻检测假阳性
Eiji Kakizaki, Norihiro Shinkawa, Ai Sonoda, Nobuhiro Yukawa,
https://doi.org/10.1016/j.forsciint.2021.111131
溺水者闭合器官中的硅藻阳性率低,给硅藻检验带来挑战。非溺水者封闭器官中的高阳性率也是一个重要问题。这些矛盾的发现在1960-80年代进行的硅藻检验研究中很常见,但原因仍不清楚。
现在研究人员在研究中发现,这其中最重要一个原因是使用强酸进行硅藻检验。
他们在第一次硅藻检验后彻底清洗,并在第二次检验前保持无组织的重复使用的凯氏定氮瓶中分别发现了1—290个假阳性硅藻。当消化的组织或水样中存在超过约10,000个硅藻时,20个案例中有11个出现了假阳性结果。重复使用的烧瓶被检测到许多常见的硅藻(<30 µm),包括Cocconeis、Cymbella、Diatoma、Gomphonema、Navicula和Nitzschia,这与在封闭器官中发现硅藻的报告一致。
令人惊讶的是,即使在第六次硅藻检验中,每次分析中都使用相同的烧瓶,但没有组织,也会出现这种假阳性结果。而且,在实验过程中用到的所有试剂中都没有检测到硅藻,也没有在其他玻璃器皿发现相关的硅藻。
因此,重复使用凯氏烧瓶很容易导致假阳性结果,也无法使用碱性洗涤剂清洗烧瓶来避免这种情况,因为即使在六次检验后也能检测到硅藻证明了这一点。
假设造成假阳性结果的硅藻被加热后部分融化并固定在烧瓶内表面的玻璃上,因为硅藻壳主要由二氧化硅组成,与玻璃类似。粘附的硅藻会在下次硅藻检验重新加热时从玻璃上释放出来。
这些结果还表明,由于反复重复使用分析肺部或水样,烧瓶中剩余的硅藻数量会稳步增加。
相比之下,在仅使用新烧瓶的分析中,在20名溺水者的20个肾脏样品中的4个、12个肝脏样品中的2个以及8个、血液样品中的2个中只发现了1或2个硅藻。很难确定这些硅藻是否是通过血液循环携带的,因为在解剖过程和硅藻检验过程中可能会出现少量硅藻的污染。
总之,只有新的(未使用过的)凯氏烧瓶才能用于强酸消化的硅藻检验。此外,这些数据表明,存在于溺水者封闭器官中的硅藻的数量和频率可能比以前认为的低得多。